prucommercialre.com


¿Cuál es el punto isoeléctrico?

Las proteínas se construyen de cadenas de aminoácidos, cada uno de los cuales tienen diferentes valores de pH. El pH global de la proteína se compone de la mezcla de los valores de pH de los aminoácidos individuales a medida que se forman iones en la solución particular en la que se disuelven. El punto isoeléctrico (pI) de una proteína es el pH al cual la proteína que no tiene carga neta. Esta propiedad puede ser explotada para separar la proteína con el pI conocido a partir de otras proteínas en una mezcla heterogénea.

Los aminoácidos tienen un grupo amino terminal que es básico, que tiene un alto pH. El otro extremo del aminoácido es el carboxilo terminal que es ácida, con un pH bajo. A valores de pH diferentes, los aminoácidos en las proteínas variarán en sus cargos. Las proteínas por debajo de su punto isoeléctrico tienen una carga positiva. Por el contrario, los mayores de este punto tienen una carga negativa.

Para explotar el conocimiento del punto isoeléctrico para la purificación de proteínas, una mezcla de proteínas se somete a un campo eléctrico. Esto se hace comúnmente en agarosa o geles de poliacrilamida, y se conoce como enfoque isoeléctrico. Una técnica más antigua es llevar a cabo el procedimiento a una escala mayor en una columna de vidrio usando una solución de sacarosa con electrodos en cada extremo. Se añaden compuestos llamados anfolitos que causan la formación de un gradiente de pH consistente. Cuando el gel o de la columna se somete a la corriente eléctrica, las proteínas migran hasta que llegan a su punto isoeléctrico y, a continuación, permanecen estacionarios.

Las proteínas en los geles se hacen generalmente visible por un colorante que se une proteínas. A veces, si están siendo estudiados enzimas, un sustrato se puede utilizar que da una reacción de color. Por lo general, las normas se utilizan que tienen proteínas de puntos isoeléctricos conocidos.

Una vez que se sabe donde se encuentra la proteína deseada, una técnica común es cortar la proteína aislada del gel. La proteína puede entonces ser purificado y secuenciado. Una vez que se conoce la secuencia, puede usarse para diseñar cebadores para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se utiliza para clonar el gen para la proteína si el material de ácido nucleico adecuada está disponible.

Isoelectroenfoque es también una forma común para analizar proteínas homólogas para ver lo diferentes que son unos de los otros. Una de las complicaciones puede ser que las proteínas pueden tener azúcares unidos a ellos. Esto se conoce como la glicosilación y puede afectar a la proteina pI € s. Puede parecer que hay múltiples proteínas con diferentes puntos isoeléctricos, cuando en realidad sólo hay una proteína que ha sido glicosilada diferencialmente. Proteínas purificadas por métodos estándar, tales como cromatografía a veces se analizaron mediante isoelectroenfoque para garantizar su pureza.